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科研服務(wù)

SCIENTIFIC SERVICE

熒光定量PCR檢測/WesternBlot

熒光定量PCR檢測服務(wù)

　　1.服務(wù)描述

　　熒光定量PCR技術(shù)(Fluorescence Quantitative Real Time PCR，RT-PCR)是在常規(guī)PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)。該熒光物質(zhì)能夠隨著PCR反應(yīng)產(chǎn)物的不斷累加，產(chǎn)生成比例的熒光信號強度。這樣就可以通過監(jiān)測熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。目前，實時熒光定量PCR技術(shù)已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于生物基礎(chǔ)科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)臨床診斷、疾病研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域。本公司可根據(jù)您的科研需求，為您提供SYBR Green染料法或TaqMan探針法實時熒光定量PCR檢測服務(wù)。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)對基因的相對定量、絕對定量和定性分析。

　　2.服務(wù)內(nèi)容

　　1：mRNA 的定量分析：

　　熒光定量PCR可以利用內(nèi)參基因?qū)嶒灮虻谋磉_進行相對定量分析，也可以通過外用標(biāo)準(zhǔn)品對實驗基因進行絕對定量分析。

　　2：miRNA 的定量與定性分析：

　　MicroRNA(miRNA)成熟體是由21—23個堿基構(gòu)成的含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的單鏈小分子RNA，長度太短不能通過普通的實時定量PCR進行檢測。因此，我們通過加尾法(在miRNA的3’段加一個polyA尾巴)及頸環(huán)法(設(shè)計特殊的含有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄引物，配合實時定量PCR引物及探針)可以精確檢測微量樣品中microRNA表達水平。

　　3：lncRNA的定量與定性分析：

　　長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)與mRNA相比是不編碼蛋白的，但又比miRNA要長(大于200nt)，研究證明ncRNA 能在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達，與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治有著密切的聯(lián)系。我公司可設(shè)計特異性引物對lncRNA進行定量分析。

　　4：定性分析

　　熒光定量PCR還可以用來檢測單核苷酸多態(tài)性(SNP)、點突變、等位基因以及DNA甲基化等。能夠簡單快速地對目的基因進行高特異性、高靈敏度的檢測，同時閉管操作的實時檢測可以有效防止反應(yīng)產(chǎn)物的污染。

　　3.主要過程

　　4.服務(wù)說明

　　1：在服務(wù)開始前，請先咨詢我們公司。我們會針對您的實驗?zāi)康脑O(shè)計個性化的最優(yōu)實驗方案。

　　2：客戶提供的實驗材料必須在正確的條件下保存和運輸(上海本地客戶我們可以上門提取)。我們不推薦直接提供RNA或cDNA樣品，除非能證明提供的樣品質(zhì)量可以用于熒光定量PCR。

　　3：客戶需提供盡可能詳細的實驗背景信息(包括物種信息，目的基因信息等)。

　　4：客戶可以自己提供熒光定量PCR引物，也可以由我們設(shè)計并合成，但需收取相應(yīng)費用。

　　5：為了確保實驗數(shù)據(jù)的可靠性，每個樣品我們都采用三復(fù)孔，且保證熔解曲線的單一性。

　　5.服務(wù)周期

　　實驗周期視具體的樣品數(shù)量及需測定的數(shù)據(jù)數(shù)目而定。

　　6.客戶所得

　　1：熒光定量PCR的原始數(shù)據(jù)及分析結(jié)果;

　　2：完整的實驗報告(包括實驗材料，步驟，結(jié)果分析等);

WesternBlot 服務(wù)

　　1.服務(wù)描述

　　Western Blot 實驗首先通過變性聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳將蛋白質(zhì)混合物進行分離，然后將其轉(zhuǎn)移至固相支撐物(NC膜，PVDF膜)上。這時的蛋白質(zhì)是以非共價鍵形式吸附在固相支撐物上，固相支撐物經(jīng)目的蛋白的一抗和酶標(biāo)二抗孵育后，即可通過底物顯色來檢測目的蛋白的表達。該方法是蛋白質(zhì)工程研究中的常規(guī)技術(shù)。

　　2.服務(wù)內(nèi)容

　　1：樣品蛋白質(zhì)的抽提與定量;

　　2：摸索，優(yōu)化實驗條件并完成Western Blot 實驗;

　　3：圖片分析;

　　3.服務(wù)說明

　　1：我們接受任何形式的實驗樣品(組織、細胞及蛋白質(zhì)混合溶液等);但客戶必須提供足量的滿足實驗要求的樣品。同時應(yīng)注意避免樣品之間交叉污染，及樣品的反復(fù)凍融;

　　2：客戶需自己提供實驗用一抗，也可以由我公司代購(實驗完成后剩余抗體返還客戶);

　　3：我們采用PVDF膜作為固相支撐物，每張膜可以檢測10個蛋白樣品(包括蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn))。

　　4.客戶所得

　　1：剩余的實驗樣品(包括客戶提供的一抗);

　　2：Western Blot曝光原始底片及處理后圖片;

　　3：完整的實驗報告;